عنوان :

پایان نامه بررسی عفونت ریوی مایکوپلاسمایی ناشی از مایکوپلاسما مایکوئیدس واریته مایکوئیدس و مایکوپلاسما کاپری کولوم واریته کاپری کولوم در گوساله‌ها و بزهای کشتارشده به روش PCR

 

تعداد صفحات : ۱۷۹

نوع فایل : ورد و قابل ویرایش

چکیده

عامل اصلی بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان ـ که امروزه به نام مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس بیوتایپ کلونی کوچک شناخته می‌شود- در سال ١٨٩٨ برای اولین بار توسط نوکارد وروکس شناسایی گردید. در آن زمان، اولین نام نهاده شده بر این اجرام، پلوروپنومونی بود که بعد از این که اجرامی با خصوصیت مشابه این میکروارگانیسم از منابع دیگر به دست آمد، بنام اجرام شبه پلوروپنومونی نام‌گذاری شد. ۶٠ سال بعد، نواک نام مایکوپلاسما را به عنوان نام ژنریک اجرامی که فاقد دیواره سلولیاند، پیشنهاد کرد.

کلاستر مایکوپلاسما مایکوئیدس در برگیرنده مهمترین پاتوژنهای تنفسی نشخوارکنندگان است که سالیانه، خسارات اقتصادی سنگینی بر صنعت دامپروری کشورهای جهان وارد می‌کند. اخیرا شیوعهای بازپدیدی از عفونتهای پلوروپنومونی نشخوارکنندگان در منطقه خاورمیانه گزارش شده است. در این شرایط تعیین وضعیت گله‌های کشور از نظر آلودگی به گونه‌های پاتوژن این کلاستر، از اهمیت خاصی برخوردار است. هنوز گزارشی از شناسایی و جداسازی گونه‌های درگیر از عفونت پلوروپنومونی در ایران بدست نیامده است. عدم برخورداری از خصوصیت پاتوگونومیک در نمونه‌های بالینی و دشواریهای فراوان جداسازی میکروارگانیسم، به ضرورت شناسایی و بکارگیری روشهای تشخیصی جایگزین افزوده است.

هدف از این مطالعه، بررسی عفونت‌های تنفسی ناشی از کلاستر مایکوئیدس در  گله‌های نشخوارکنندگان از طریق کشت و PCR می‌باشد. در این مطالعه‌، ۱۰۰ نمونه ریه با ضایعات مشکوک به عفونتهای تنفسی مایکوپلاسمایی از ۱۰۰  گله مشکوک (۵۰ گله گاو،۳۰ گله گوسفند،۲۰ گله بز) در اطراف کرمانشاه ، جمع آوری شدند. ضایعات ماکروسکوپی شامل کبدی شدن ریه‌ها با زخم‌های خاکستری و سفید(جامد شدن) و ظاهر منقوط با یا بدون فیبرین بودند. نمونه‌ها در محیط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند. پس از پاساژهای متعدد،از ۲۳ گله مشکوک،تک کلونی تخم‌مرغی شکل مایکوپلاسما جداشد(۱۱ گله گاو،۸ گله گوسفند،۴ گله بز).

اما در واکنش, PCR63  گله عفونت مایکوپلاسمای تنفسی نشان دادند (۳۷ گله گاو، ۱۷ گله گوسفند، ۹ گله بز).

این امر، مبین این نکته است که علیرغم اینکه جداشدن عامل مایکوپلاسمایی از نمونه‌ها در محیط کشت، اساس تعیین وضعیت عفونت‌های مایکوپلاسمایی قلمداد می‌شود، اما  سخت‌رشد بودن گونه‌های مورد مطالعه در محیط کشت و عدم دستیابی سریع به نتیجه، کارآیی این روش تشخیصی را در پایش متداول عفونت گله‌ها زیر سوال برده است.

علاوه بر این، بکاربردن آنتی بیوتیکهای متنوع در دوره درمان و از بین رفتن میکروارگانیسم در خلال جمع آوری نمونه، ‌نتایج رشد در محیط کشت مایکوپلاسما را دستخوش تغییر داده است.

از این رو،‌ استفاده از روشهای مولکولی PCR بعنوان یک روش کاربردی،  حساس و سریع توصیه می‌شود. پس از استخراج ‌DNA نمونه‌ها به روش فنل کلروفورم و جدا کردن نمونه‌های آلوده به مایکوپلاسما از طریق PCR ، با استفاده از پرایمر اختصاصی کلاستر مایکوئیدس نمونه‌های مایکوپلاسمایی تحت واکنش PCR قرار گرفتند.

واژه های کلیدی:  عفونت‌های تنفسی ، کلاستر مایکوئیدس ، مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس بیوتایپ کلونی کوچک،  کشت ، PCR

فهرست مطالب

الف- مقدمه        ۱
ب-چکیده        ۳
فصل اول:کلیات     ۵
۲- خصوصیات کلی مایکوپلاسما    ۶
۳- مقاومت مایکوپلاسماها     ۸
۴- طبقه بندی مایکوپلاسماها     ۹
۵- طبقه بندی کلاستر مایکوئیدس    ۱۲
۶- فیلوژنی        ۱۴
۷- ساختمان      ۱۵
۱-۷-ساختمان مایکوپلاسما مایکوئیدس         ۱۵
۲-۷- ساختمان مایکوپلاسما کاپری کولوم     ۱۷
۸- بیولوژی مولکولی    ۱۹
۹- توالی‌های تکراری    ۲۳
۱۰- پروتئینهای سطحی    ۲۵
۱۱- فاکتور حدت    ۳۰
۱۲- آنالیز پروتئین      ۳۲
۱۳- طبقه بندی سویه‌ها     ۳۴
۱۴- مشخصات گونه مایکوئیدس    ۳۵
۱۵- کشت و رشد گونه مایکوئیدس     ۳۸
۱۶- کشت و رشد گونه کاپری کولوم     ۴۱
۱-۱۶- محیط Thiacourt      ۴۱
۱۷- بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان    ۴۴
۱-۱۷- علائم بالینی     ۴۵
۲-۱۷- علائم کالبدگشایی بیماری     ۴۷
۳-۱۷- پاتوژنز     ۵۰
۱-۳-۱۷- مکانیسمهای مقابله با دستگاه ایمنی    ۵۳
۴-۱۷- اختصاصیت میزبان    ۵۷
۵-۱۷- انتقال بیماری      ۵۸
۶-۱۷- سیر همه گیری     ۵۹
۱-۶-۱۷- مخزن    ۵۹
۲-۶-۱۷- راه انتقال     ۵۹
۷-۱۷- پیشگیری و کنترل    ۶۰
۱-۷-۱۷- اقدامات لازم برای حفاظت مناطق عاری از بیماری    ۶۱
۲-۷-۱۷- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری    ۶۲
۳-۷-۱۷- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی    ۶۳
۱۸- بیماری پلوروپنومونی واگیر بزان     ۶۳
۱-۱۸- علائم بالینی     ۶۴
۲-۱۸- علائم کالبد گشایی    ۶۶
۱۹- گونه مایکوپلاسما کاپریکولوم کاپریکولوم    ۶۹
۱-۱۹- سندروم MASKePs    ۷۰
۲-۱۹- علائم بالینی    ۷۱
۳-۱۹- علائم کالبد گشایی    ۷۱
۴-۱۹- سندروم آگالاکتیه واگیر    ۷۳
۲۰- گونه مایکوپلاسما کاپری     ۷۳
۱-۲۰- بیماریزایی     ۷۳
۲-۲۰- علائم کالبد گشایی    ۷۴
۲۱- سیر همه‌گیری     ۷۵
۱-۲۱-مخزن         ۷۵
۲-۲۱-راه انتقال         ۷۶
۳-۲۱-جمعیت میزبان     ۷۷
۲۲-پیشگیری وکنترل          ۷۷
۱-۲۲- اقدامات لازم برای محافظت مناطق عاری از بیماری     ۷۷
۲-۲۲- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری     ۷۸
۳-۲۲- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی     ۷۸
۲۳-واکسن         ۷۹
۱-۲۳-واکسن MmmLC          ۷۹
۲-۲۳-واکسن Mccp      ۷۹
۳-۲۳-واکسن Mcc   ۷۹-اختصاصیت میزبان در کلاستر مایکوئیدس        ۸۰
۲۵-تشخیص افتراقی     ۸۰
۱-۲۵-شناسایی عامل بیماری زا             ۸۱
۱-۱-۲۵-بررسی میکروسکوپیک اگزودای ریه از طریق تهیه اسمیر یا برش بافتی     ۸۱
۲-۲۵- تشخیص آزمایشگاهی      ۸۱
۱-۲-۲۵- روش کشت و جداسازی     ۸۱
۱-۱-۲-۲۵- انتخاب نمونه ها          ۸۲
۲-۱-۲-۲۵- آماده سازی نمونه ها          ۸۲
۳-۲۵- تستهای بیوشیمی     ۸۳
۴-۲۵- روشهای سرولوژی     ۸۵
۱-۴-۲۵- عوامل موثر در آزمایشات سرولوژی              ۸۵
۲-۴-۲۵- تست مهاری رشد           ۸۷
۳-۴-۲۵- تست ایمونو فلورسانس          ۸۸
۴-۴-۲۵- تست رسوب ژلی         ۸۸
۵-۴-۲۵- تست فیکساسیون کامپلمان          ۸۹
۶-۴-۲۵- تست ممانعت از هماگلوتیناسیون          ۸۹
۷-۴-۲۵- تست آگلوتیناسیون لاتکس     ۹۰
۸-۴-۲۵- تست الیزای رقابتی     ۹۱
۹-۴-۲۵- سایر تستهای تشخیصی     ۹۴
۵-۲۵ – مشکلات روشهای سنتی     ۹۴
۶-۲۵- تشخیص با استفاده از PCR     ۹۵
فصل دوم: روش کار
۲۶- روش کار     ۱۰۱
۱-۲۶- جمع آوری نمونه         ۱۰۱
۱-۱-۲۶- مواد لازم        ۱۰۱
۲-۱-۲۶- بخش جمع آوری نمونه    ۱۰۱
۳-۱-۲۶- نمونه برداری     ۱۰۳
۲-۲۶- کشت و جداسازی نمونه ها    ۱۰۴
۱-۲-۲۶- مواد لازم     ۱۰۴
۲-۲-۲۶- طرز تهیه محیط کشت اختصاصی برای جداسازی مایکوپلاسمای نشخوار کنندگان         ۱۰۶
۱-۲-۲-۲۶- مواد لازم     ۱۰۶
۲-۲-۲-۲۶- روش تهیه محیط کشت        ۱۰۷
۳-۲۶- استخراج DNA مایکوپلاسما    ۱۰۹
۱-۳-۲۶- روش استخراج DNA از نمونه های ارسالی        ۱۰۹
۴-۲۶- فرایند PCR     ۱۱۰
۱-۴-۲۶- مواد لازم     ۱۱۰
۲-۴-۲۶- آماده سازی مواد جهت واکنش PCR         ۱۱۲
۱-۲-۴-۲۶- افزوده سازی DNA نمونه‌ها     ۱۱۲
۲-۲-۴-۲۶- افزوده سازی DNA کلونیهای جدا شده    ۱۱۵
۳-۲-۴-۲۶- تهیه مخلوط اصلی اولیه    ۱۱۵
۳-۴-۲۶- پرایمرها    ۱۱۵
۴-۲۶- واکنش PCR    ۱۱۷
۵-۲۶- تهیه ژل الکتروفورز     ۱۱۸
۱-۵-۲۶- طرز تهیه محلول اتیدیوم برماید         ۱۱۹
۶-۲۶- الکتروفورز         ۱۲۱
۷-۲۶- رویت باندهای ایجاد شده     ۱۲۲
فصل سوم: نتایج
۲۷- نتایج         ۱۲۴
۱-۲۷- جداسازی    ۱۲۴
۱-۱-۲۷- بررسی عملکرد محیط کشت    ۱۲۴
۲-۱-۲۷- نتایج کشت نمونه های ارسالی     ۱۲۴
۱-۲-۱-۲۷- نتایج روز پنجم      ۱۲۵
۲-۲-۱-۲۷- نتایج روزهفتم تا دهم    ۱۲۵
۳-۲-۱-۲۷- نتایج روزپانزدهم    ۱۲۶
۲-۲۷- نتایج  PCR          ۱۲۶
۱-۲-۲۷- نتایج  PCR نمونه ها با پرایمر جنس     ۱۲۶
۲-۲-۲۷- تائید کلونی های جدا شده    ۱۲۷
۳-۲-۲۷- نتایج  PCR نمونه ها با پرایمر کلاستر مایکوئیدس    ۱۲۷
۴-۲-۲۷- نتایج  PCR نمونه ها با پرایمر گونه آگالاکتیه    ۱۲۸
۵-۲-۲۷- نتایج  PCR نمونه ها با پرایمر گونه مایکوئیدس کلونی بزرگ        ۱۲۹
۳-۲۷- نتایج کالبد گشایی    ۱۳۰
۱-۳-۲۷- معیار انتخاب     ۱۳۰
فصل چهارم: بررسی نتایج
نمودارها        ۱۳۱
فصل پنجم: بحث
۲۸- بحث         ۱۳۹
۱-۲۸- ضایعات کالبد گشایی        ۱۳۹
۲-۲۸- میزان وقوع عفونت تنفسی مایکوپلاسما     ۱۴۱
۳-۲۸- روش کشت    ۱۴۲
۴-۲۸- روش  PCR      ۱۴۷
۵-۲۸- فراوانی گونه ها     ۱۵۲
۲۹- خلاصه انگلیسی    ۱۵۹
۳۰- منابع         ۱۶۰

منابع

Abdo E M, Nicolet J, Frey J. (2000). Antigenic and genetic characterization of LPPQ from Mycoplasma mycoides mycoides Small Colony.Clin Diag Lab Immun.7:4, 588-593.

Adehan R K, Ajuwape A T P, Adetosoye A I, Alaka O O. (2007). Biochemical and serological identificatrion of Mycoplsma isolated from pneumonic lungs of cattle. Philipine J Vet Med. 44:1, 8-13.

Alberti A, Robino P, Chessa B, Rosati S, Filippa Addis M, Mercier P, Mannelli A, Cubeddu T, Profiti M, Bandino E, Thiery  R, Pittau M. (2007). Characteriterization of Mycoplasma capricolum capricolum P650 surface lipoprotein and its evaluation in a recombinant ELISA. Vet Mic.In Press.

Amanfu W, Sediadie S, Masupu K V, Raborokgwe MV, Benkirane A, Geiger R, Thiaucourt F. (2000). Comparison between c-ELISA and CFT in detecting antibodies to Mycoplasma mycoides mycoides Small Colony in cattle affected by Contagious Bovine Pleuropneumonia in Botswana. Annals of the New York Academy of Sciences. 916: 364-369.

Arif A, Schulz J. (2007). Contagious Caprine Pleuro Pneumonia outbreak in captive wild ungurates at AlWabra Wildlife preservation. state of Qatar. J of Zoo and Wildlife Med. 38:1, 93-96.

Ayling R D, Nicholas R A J. (2005). Treatment of mycoplasmosis infections. Proceedings of the 38^th annual convention, American Association of Bovine Practitioners, USA. 2005: 6-10.

Barbosa V P, Nascimento E R, Danelli M, Nascimento M, Santos M A J, Lignon G B, Ribeiro V R. (2000). Differentiation of Mycoplasma mycoides types causing mycoplasmosis in goats.Revista Brasilia de Veterinaria. ۷:۱, ۳۳-۳۶٫

Bashiruddin J B, Santini F G, Santis P, Visaggio M C, Francesco G, D’Angelo A, Nicholas R A J. (1999). Detection of Mycoplasma mycoides mycoides Small Colony in tissues from an outbreak of Contagious Bovine Pleuro Pneumonia by culture, IHC and PCR.Vet Rec. 145: 10, 271-274.

Bascunana C R, Mattsson J G, Bolske G, Johansson K E. (1994). Characterization of the 16s rRNA genes from Mycoplasma. spp strain F38 and development of an identification system based on PCR. J of Bac. ۲۷۶:۹, ۲۵۷۷-۲۵۸۶٫

Bellini S, Giovannini A, Francesco C, Tittarelli M, Caporale V. (1998). Sensitivity and specificity of serological and bacteriological tests for Contagious Bovine Pleuro Pneumonia. Rev Sci et Tech- Office International des Epizooties. 17: 3, 654-659.

Bolske G, Mattson J, Bascunana C, Bergstrom K, Wesonga H, Johansson K. (1996). Diagnosis of Contagious Caprine Pleuro Pneumonia by detection and identification of Mycoplasma capricolum capripneumonia by PCR and REA. J Clin Mic. 34:4, 785-791.

مقدمه

عفونت پلوروپنومونی واگیر،‌ بیماری تحلیل برنده تنفسی است که با جای گرفتن در طبقه‌بندی بیماریهای سازمان جهانی کنترل بیماریهای واگیر، لزوم و اهمیت شناسایی آن مشخص شده است. عامل اصلی این بیماری، گونه مایکوپلاسما مایکوئیدس می‌باشد که تایپ کلونی کوچک آن[۱] بطور اختصاصی به گله‌های گاو، خسارات فراوانی ناشی از همه‌گیری گسترده و مرگ و میر فراوان تحمیل کرده است.

تایپ کلونی بزرگ این گونه[۲] همراه با دو گونه دیگر بنامهای مایکوپلاسما کاپری کولوم کاپری کولوم[۳] و مایکوپلاسما مایکوئیدس کاپری[۴] فرم غیرکلاسیک پلوروپنومونی واگیر را در گله‌های گوسفند و بز بوجود آورده‌اند. این بیماری در فرم کلاسیک، که عامل آن مایکوپلاسما کاپری کولوم کاپری پنومونی[۵] شناخته می‌شود، خسارات اقتصادی سهمگینی در گله‌های بز و گوسفند موجب گردیده است.

از آنجائیکه منطقه خاورمیانه جزو مناطق مشکوک به آلودگی پلوروپنومونی واگیر محسوب می‌شود، حفظ وضعیت عاری بودن از عفونت در این منطقه، مشکل یا تقریبا غیرممکن بوده و نیازمند بازنگری درراهبردهای بکار رفته به منظور تشخیص و کنترل این عفونت‌هاست. عدم برخورداری از خصوصیت پاتوگونومیک تشخیصی و پاتولوژیکی‌، مسیر بیماریزایی ناشناخته و تنوع فنوتیپی بسیار پیچیده ارگانیسم در مواجهه با دستگاه ایمنی میزبان، بر مشکل شناسایی آن افزوده است. علاوه بر  این ، ابقا طولانی مدت باکتری در محل عفونت و وجود ناقلین بدون علامت‌، برنامه کنترل بیماری را با چالش روبرو کرده است.

از این رو، شناسایی و بکارگیری روشهای تشخیصی و تفریقی گونه‌های کلاستر مایکوپلاسما مایکوئیدس که هرکدام استراتژی جداگانه ای در برخورد با عفونت گله‌ها دارند، از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است.

از آنجایی که مایکوپلاسماهای پاتوژن در محیط کشت به سختی رشد می‌کنند، استفاده  متداول از روش کشت و جداسازی، شناسایی عفونت گله‌ها را با مشکل روبرو کرده است.

از طرف دیگر، عمدتا به دلیل تشابه آنتی ژنتیکی بین گونه‌های کلاستر مایکوئیدس و سایر گونه‌های مایکوپلاسما، روشهای سرولوژی از دقت و ویژگی کافی در تمایز گونه‌ها برخوردار نیستند. لذا به رهیافت روش‌های مولکولی مانندPCR بعنوان روشی سریع،  دقیق و با حساسیت و ویژگی مطلوب در کنترل عفونت گله‌ها، توجه ویژه‌ای می‌شود.

هدف از این مطالعه، بررسی عفونت‌های تنفسی ناشی از کلاستر مایکوئیدس در  گله‌های نشخوارکنندگان از طریق کشت و PCR می‌باشد.

۱- تاریخچه

عامل اصلی بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان[۱] ـ که امروزه به نام مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس بیوتایپ کلونی کوچک[۲] شناخته می‌شود- در سال ١٨٩٨ برای اولین بار توسط نوکارد[۳] وروکس[۴] شناسایی گردید. در آن زمان، اولین نام نهاده شده بر این اجرام، پلوروپنومونی بود که بعد از این که اجرامی با خصوصیت مشابه این میکروارگانیسم از منابع دیگر به دست آمد، بنام اجرام شبه پلوروپنومونی نام‌گذاری شد. ۶٠ سال بعد، نواک نام مایکوپلاسما را به عنوان نام ژنریک اجرامی که فاقد دیواره سلولیاند، پیشنهاد کرد (۴۵).

٢- خصوصیات کلی مایکوپلاسما

مایکوپلاسماها، جزو کوچک‌ترین پروکاریوت‌هایند (μm١۵-٠)  که قادرند از فیلترهای مخصوص باکتری (μm۴۵-٢٢/٠) عبور کنند. این اجرام به دلیل فقدان دیواره سلولی، اشکال پلی‌مورفیک دارند و به اشکال کروی (μm٣/٠-٩/٠)، رشته‌ای (تا μm١)،گلابی شکل، شاخه‌ای و مارپیچی  در زیر میکروسکوپ الکترونی دیده می‌شوند. در واقع، بیشتر شبیه به فرم L باکتری‌ها می باشند.ارگانیسم از سه ارگانل شامل غشا سلولی، ریبوزوم و مولکول حلقوی DNA تشکیل شده است. تصویر مایکوپلاسما در زیر میکروسکوپ الکترونی، شبیه فیلامان (بطری) است که از دو انتها طویل شده است. این اندامک‌‌های انتهایی[۵]، محل اتصال به غشا یوکاریوت است که دارای یک ساختمان مرکزی میله مانند[۶] می‌باشد و توسط غشا احاطه شده است (۷۰).

مجموعه خصوصیاتی مانند عبور از صافی‌های مخصوص پالایش باکتری، عدم حساسیت به آنتی‌بیوتیک‌ها و دشواری‌های رشد، آن‌ها را شبیه به ویروس‌ها کرده است. ولی وجود محتوای ژنتیکی DNA (٧-۵/١)% و RNA (١٧-٨)% که توسط غشای پلاسمایی سه لایه‌ای حفاظت شده است، سبب تمایز آن‌ها از ویروس‌ها، کلامیدیا وریکتزیاها می‌شود. به دلیل دارا بودن حداقل ژن‌های لازم برای تکثیر مستقل- که در حدود  تا  محتوای ژنتیکی E.coli است ـ نیازمند موجودات زنده برای تکثیر و زنده‌مانی نمی‌باشند (۵۰).

ولی به هر حال تعداد کم ژن‌ها، منجر به رشد بطئی، ونیاز قابل توجه به میزبان برای تامین برخی از مواد مغذی و بقا شده است. به همین علت بسیاری از مایکوپلاسماها به عنوان انگل‌های سطحی در غشا مخاطی دستگاه تنفس چشم، ادراری تناسلی، بافت پستانی و مفاصل شناخته شده اند و به ندرت بافت‌ها را مورد تهاجم قرار می‌دهند (۴۷).

البته انتشار آن‌ها به اندام‌های مختلف بیانگر وجود حداقل یک عفونت گذراست. به طور کلی، تنها برخی گونه‌های مایکوپلاسما و احتمالاً‌ سویه‌های خاص، تمایل بیشتری به بعضی بافت‌ها یا اندام‌ها دارند، هر چند که این تمایل به معنای حذف کامل تمایل به سایر بافت‌ها نمی‌باشد. اغلب مایکوپلاسماها، به عنوان آلوده کننده محیط کشت سلولی شناخته می‌شوند که تشخیص و کنترل آلودگی آنها مشکل است (۵۰).

مایکوپلاسماها با استفاده از توانایی حرکت خود که به صورت سرخوردن است[۷]، خود را به سلول‌های هدف می‌رسانند. این حرکت کند بوده و تحت تاثیر آنتی‌بادی‌های اختصاصی مهار می‌شود (۷۴).

بسیاری از مایکوپلاسماها، بی‌هوازی اختیاری بوده و بعضی به صورت مطلوب در اتمسفری با ١٠ -۵% CO₂ رشد می‌کنند. مایکوپلاسماهای بی‌هوازی غیرپاتوژن در شکمبه گوسفند و گاو یافت می‌شود (۲).

۳-مقاومت مایکوپلاسماها

این اجرام توانایی تولید دیواره سلولی پلی‌مورفیک و پپتیدوگلیکانی را دارند و از همین رو، به آن‌ها باکتری‌هایی  با نقص دیواره سلولی[۸] اطلاق می‌شود. آنتی‌بیوتیک‌هایی که بر روی دیواره سلولی اثر می‌کنند،(دسته بتالاکتامز) مانند پنی‌سیلین و سفالوسپورین، آن‌ها را از بین نمی‌برند. اگر چه نسبت به آنتی‌بیوتیک‌هایی که بر روی سنتز پروتئین اثر دارند (مانند تتراسایکلین) ‌حساسند، ولی این آنتی‌بیوتیک‌ها در بدن حیوانات زنده زیاد موثر نیستند، زیرا گاهی غلظت کافی آن‌ها به سطح اپی‌تلیومی که توسط مایکوپلاسماها احاطه شده است، نمی‌رسد. از خصوصیت مقاوم بودن به پنی‌سیلین و استات تالیم، برای جلوگیری از رشد میکروب‌های آلوده کننده محیط کشت استفاده می‌شود (۷۲).

در آزمایش‌های تجربی، مایکوپلاسماها به شوک اسموتیک، ضدعفونی کننده‌های محیطی، الکل، گرما و خشکی، آنتی‌بادی‌های اختصاصی وکامپلمان حساس می‌باشند. دمای °C۵۵ به مدت ‘١۵ و °C۶٠ به مدت ‘۵ آن‌ها را از بین می‌برد. برای مثال گونه مایکوئیدس مایکوئیدس در خارج از بدن حیوان بیش از چند ساعت، قادر به ادامه حیات نمی‌باشد، ولی در محل عفونت تا مدت‌ها باقی می‌ماند. از گاوهایی که در ١٠ ماه پیش به بیماری پلوروپنومونی واگیر مبتلا بوده‌اند، میکروارگانیسم جدا شده است (۷۲). سکوستراهای ریوی منبع بالقوه‌ای از آلودگی  هستندو ارگانیسم را برای زمانی به مدت ٣ سال نگهداری می‌کنند. به همین علت، کانون‌های عفونت در اکثر موارد، حیوانات بهبود یافته‌اند. ترکیبات دیگر از قبیل جفت و ادرار نیز می‌توانند ارگانیسم‌ها را برای مدت طولانی زنده نگه‌دارند. گزارش شده است که یونجه آلوده به میکروارگانیسم تا مدت ١٢۴ ساعت، قادر به انتقال آلودگی است. هم‌چنین در ریه منجمد تا چندین ماه و در محیط کشت خشک شده در خلا، چندین سال زنده می‌ماند. فنل ١%، فرمالین ۵/٠% و کلرید جیوه ١% به مدت چند دقیقه میکروارگانیسم را از بین می‌برند (۴۴).

۴-طبقه‌بندی مایکوپلاسماها

با استفاده از آنالیز توالی ژن ۱۶S-rRNA، تصور می‌شود که مایکوپلاسماها در حدود ۶٠٠ میلیون سال قبل با از دست دادن قسمت‌های غیر ضروری ژنوم خود، از جمله ژن‌های سنتز دیواره سلولی از باکتری‌های گرم مثبت و مشخصاً کلستریدیومها مشتق شده‌اند (۵۰).

از نظر فیلوژنی، مایکوپلاسماها به کلاس Mollicutes، رده Mycoplasmatales و خانواده Mycoplasmatacea تعلق دارند. کلاس Mollicutes، بیش از ١٠٠ گونه از مایکوپلاسماهای گیاهان، مهره‌داران و حشرات را در بر می‌گیرد و از ۵ جنس تشکیل شده است که در میان آن‌ها، مایکوپلاسما، اوروپلاسما[۹] و آنئروپلاسما[۱۰]، بیشترین میزبانان را در انسان و حیوان دارا هستند. (جدول٢)

بر اساس آنالیز توالی قطعه V₂ از ژن ۱۶S-rRNA، مایکوپلاسماها به ۴ دسته تقسیم‌بندی شده‌اند: ١ـ پنومونی، ٢ـ هومی‌نیس[۱۱]، ٣ـ اسپیروپلاسما و ۴ـ آئروپلاسما.

سه گونه مایکوپلاسمای بیماری‌زا در انسان، پنومونی،‌هومی‌نیس و اوروپلاسما هستند که به ترتیب اختلالات تنفسی، و یوروجنیتال را به وجود می‌آورند.بیماری‌زاترین گونه‌ها در نشخوارکنندگان، متعلق به کلاستر مایکوئیدس است که در دسته اسپیروپلاسما جای گرفته است (۹) .اعضا این کلاستر که عمدتاً مسئول عفونت‌های تنفسی هستند، از نظر خصوصیات آنتی‌ژنتیکی و فنوتیپی، وجه اشتراک زیادی دارند که تمایز و تفکیک آن‌ها را در تست‌های متعارف آزمایشگاهی با چالش روبه‌رو می‌کند. جدول ٢ به معرفی اعضا این کلاستر و میزبانان اصلی آن‌ها پرداخته است. در میان اعضا، مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس بیوتایپ کلونی بزرگ[۱۲] و مایکوپلاسما کاپری‌کولوم کاپری‌پنومونی[۱۳] از مهم‌ترین پاتوژن‌های شناخته شده در نشخوارکنندگان هستند. بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان و پلوروپنومونی واگیر بزان، دو بیماری مطرح شده در فهرست  A و B سازمان جهانی کنترل بیماری‌های واگیر جانوری اند که تشخیص و گزارش وقوع آن‌ها، جهت احراز اقدامات فوری اجباری است (۷۲).

۵-طبقه‌بندی کلاستر مایکوئیدس

اعضا این کلاستر شامل مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس کلونی کوچک (MmmSC)، مایکوپلاسما مایکوئیدس مایکوئیدس کلونی بزرگ (MmmLC)، مایکوپلاسما کاپری‌کولوم کاپری‌پنومونی (Mccp)، مایکوپلاسما کاپری‌کولوم کاپری‌کولوم (Mcc)، مایکوپلاسما مایکوئیدس کاپری (Mmc)، سروتیپ ٧ سویه گاوی (M.bsg7)، مایکوپلاسما پوتری‌فیکنس (M.putrificans)، مایکوپلاسما کووتی (M.cowetti) و مایکوپلاسما یستی (M.yeasti) می‌باشند. دو گونه آخر جز مایکوپلاسماهای ساپروفیت اند که بیماری‌زایی آن‌ها در شرایط عادی در نشخوارکنندگان نامعلوم است و پوتری‌فیکنس از مبتلایان به سندروم نقص ایمنی انسان نیز جدا شده است (۴۷).

خسارات اقتصادی ناشی از بیماری‌زایی و حضور اعضا این کلاستر در نشخوارکنندگان، از اهمیت زیادی برخوردار است، به طوری که بیماری ناشی ازMmmSC -پلوروپنومونی واگیر گاوان (CBPP)- از مهم‌ترین معضلات مطرح اقتصادی در صنعت دامپروری در آفریقا و اخیراً در اروپاست که برای سالیان متمادی کشورهای زیادی را درگیر کرده است)۴۵).

هم‌چنین در حال حاضر، پلوروپنومونی واگیر بزان (CCPP)، بیشترین خسارات اقتصادی را در آفریقا ایجاد می‌کند که پس از طاعون نشخوارکنندگان کوچک[۱]، دومین بیماری قابل توجه را در گله‌های بز را به وجود آورده است (۱۷).

MmmLC،Mcc و Mmc سندروم MASKePs[2] را در گله‌های گوسفند و بز ایجاد می‌کنند که متداول‌ترین تظاهرات بیماری با تورم پستان بالینی، التهاب مفصل، سپتی سمی، تورم قرنیه و پلوروپنومونی در بالغین همراه است. در بزغاله‌ها پنومونی، سپتی‌سمی و التهاب  عمومی مفاصل در این سندروم دیده می‌شود (۵۲).

بیماری‌زایی bsg7 یا Msp7 که در عفونتهای همزمان با سویه P650 آغاز می‌شود، هنوز در دست تحقیق است. اخیراً همه‌گیری‌هایی در گله‌های گاو با علایم سقط، التهاب مفاصل و تورم پستان در استرالیا دیده شده که این عامل از آن‌ها جدا گردیده است (۲۶). گونه پوتری‌فیکنس عامل تورم پستان والتهاب مفاصل شناخته شده، ولی آنتی‌ژنیستی این گونه و M.cowetti و M.yeasti با سایر اعضا کلاستر  به طور بارزی متفاوت است، لذا به طور معمول به عنوان اعضا کلاسیک کلاستر مایکوئیدس محسوب نمی‌شوند. به هر حال، آنالیز فیلوژنی ژن ۱۶S-rRNA، آن‌ها را در یک کلاستر قرار داده و نشان داده است که قرابت ژنتیکی گونه‌های   cowetti و yeasti، ٧/٩٩% و با پوتری‌فیکانس ٩/٩٨% است (۵۲).

۶-فیلوژنی

اولین قدم در طبقه‌بندی مولیکیوتها به وسیله روش‌های ملکولی و ایمنی شناسی برداشته میشود. تاکنون اطلاعات تاکسونومی با ارزشی به دست آمده است، اما از روند تکامل اطلاعات زیادی در دست نمیباشد. اخیراً، بررسی ارتباط‌های فیلوژنی مولیکیوتها بر روی مناطق ریبوزومی RNA که بسیار حفاظت شده است، متمرکز گردیده است. این مناطق حفاظت شده به نسبت کل ژنوم مایکوپلاسما، بسیار کمتر دستخوش تغییر می‌شوند. امروزه توالی کامل ۴۵٠ باکتری، شناخته شده است (۵۰).

ویسبرگ[۳] در مطالعه‌ای، توالی کامل ژن۱۶S-rRNA را در بالغ از ۴٠ گونه مولیکیوتها و باکتری‌های دیواره‌دار تعیین کرد. این تحقیقات نشان داد که مولیکیوتها در گروه استرپتوکوکوس ـ لاکتوباسیل ـ باسیل که باکتری‌های G⁺ با محتوای اندک G+C هستند، قرار میگیرند و ازنیاکان کلستریدیوم‌ها مشتق شده‌اند.

آنالیز توالی ژنrRNA نشان می‌دهد که گونه‌های   Mmm و M.capricolum متعلق به یکی از ۵ گروه مولیکیوتهاهستند که در دسته اسپیروپلاسماها جای گرفته اند (۷۱).نتیجه این انشعاب، کاهش در سایز ۱۰۰۰KD ژنوم به KD۵٠٠ در جنس مایکوپلاسما و اوروپلاسما است (۴۷).

[۱]– Pest de Petite  Ruminants

[۲]– Mastitis,Arthritis,Septicemia,Keratoconjuctivitis,Pleuropneumonia

[۳]– Weisburg

[۱]– Contagious Bovine Pleuro Pneumonia

[۲]– MmmSC

[۳]– Nocard

[۴]– Rox

[۵]– Tip organelle

[۶]– Rod like

[۷]– gliding

[۸]– cell wall deficients ) CWDs)

[۹]– Uruplasma

[۱۰]– Aneroplasma

[۱۱]– hominis

[۱۲] – M.mycoides mycoides biotype large colony (MmmLC)

[۱۳] – M.capricolum capripneumonia (Mccp)

[۱]– Mycoplsma mycoides mycoides biotype Small Colony (MmmSC)

[۲]– Mycoplasma mycoides mycoides biotype Large Colony (MmmLC)

[۳]– Mycoplasma capricolum capricolum (Mcc)

[۴]– Mycoplasma mycoides capri (Mmc)

۵- Mycoplasma capricolum capripneumonia (Mccp)

120,000 ریال – خرید نهایی کردن خرید مورد به سبد خرید اضافه شد

جهت دریافت و خرید متن کامل مقاله و تحقیق و پایان نامه مربوطه بر روی گزینه خرید انتهای هر تحقیق و پروژه کلیک نمائید و پس از وارد نمودن مشخصات خود به درگاه بانک متصل شده که از طریق کلیه کارت های عضو شتاب قادر به پرداخت می باشید و بلافاصله بعد از پرداخت آنلاین به صورت خودکار  لینک دنلود مقاله و پایان نامه مربوطه فعال گردیده که قادر به دنلود فایل کامل آن می باشد .