عنوان :

مقاله کروماتوگرافی

تعداد صفحات : ۲۰

نوع فایل : ورد و قابل ویرایش

چکیده

در این مقاله با انواع جداسازی آشنا می شویم. در کروماتوگرافی که طیف گسترده ای را شامل می شود، دقت زیاد جواب بدست آمده جزء مزیت های روش است. اساس این روش بر جابجایی ذرات موجود در یک بخش متحرک بر روی یک بخش جامد است.

در کروماتوگرافی روی کاغذ فاز ثابت یک محیط آبی است که مولکولهای آن با رشته های سلولزی کاغذ کروماتوگرافی پیوندهای محکمی دارد و فاز متحرک یک حلال آلی است.

کروماتوگرافی لایه نازک جاذب به صورت لایه نازکی با ضخامت یکنواخت روی یک تکیه گاه سفت پخش می شود که معمولاً از صفحات شیشه ای سود می‌برند.

در کروماتوگرافی تعویض یونی رزینهای بار منفی را تبادل کنندگان کاتیونی و رزینهای بار مثبت را تبادل کنندگان آنیونی می نامند و جداسازی پروتئینها و اسیدهای نوکلئیک این روش است.

در کروماتوگرافی میل ترکیبی جداسازی بر اساس میل مخلوط مجهول در واکنش با موادی که ستون را با آنها پر می کنیم است

در کروماتوگرافی صاف کردن با ژل اساس جداسازی بر اندازه و وزن مولکولی مجهول ما است.

گاز کروماتوگرافی به طول مستدل از دقیق ترین روشهاست که در آن فاز متحرک گاز است و به دو صورت GLC و GSC انجام می شود.

در کروماتوگرافی فاز فوق بحرانی معمولاً ویتامینهای A و E و K و هورمونهای جنسی جدا می شود.

واژه های کلیدی: جداسازی ذرات، کروماتوگرافی روی کاغذ، کروماتوگرافی لایه نازک، کروماتوگرافی تعویض یونی، کروماتوگرافی میل ترکیبی، کروماتوگرافی صاف کردن با ژل، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا، کروماتوگرافی گازی، کروماتوگرافی فاز فوق بحرانی

فهرست مطالب

جداسازی بوسیله کروماتوگرافی    ۱
کروماتوگرافی روی کاغذ    ۱
موارد استعمال کروماتوگرافی کاغذی:    ۳
کروماتوگرافی لایه نازک    ۳
مزایای کروماتوگرافی لایه نازک نسبت به کروماتوگرافی کاغذی    ۴
معایب کروماتوگرافی لایه نازک نسبت به کروماتوگرافی کاغذی:    ۴
موارد استعمال کروماتوگرافی لایه نازک    ۵
کروماتوگرافی تعویض یونی    ۵
موارد استعمال کروماتوگرافی تعویض یونی    ۷
کروماتوگرافی میل ترکیبی    ۷
موارد استعمال کروماتوگرافی میل ترکیبی:    ۸
کروماتوگرافی صاف کردن با ژل    ۸
مواد استفاده کروماتوگرافی صاف کردن با ژل    ۱۱
کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا    ۱۱
کروماتوگرافی گازی    ۱۲
مواد استعمال گاز کروماتوگرافی    ۱۳
کروماتوگرافی فاز فوق بحرانی    ۱۳
خلاصه    ۱۵
پرسشهای مروری    ۱۶
منابع    ۱۷

منابع

۱- مبحث Fractionation of cell از کتاب The cell مؤلف: B.Alberts چاپ ۲۰۰۲: از صفحه ۴۷۸ تا ۴۸۳٫

۲- مبحث Cells can be Isolated… از کتاب The cell مؤلف: B.Alberts چاپ ۲۰۰۲: از صفحه ۴۷۰ تا ۴۷۲٫

۱٫Lodish, H.et al. Molecular cell biology. 4th eds. 2000. chapter 5: Biomembranes and the subcellular organization of eukaryotic cells.

۲٫ Cooper, G.A Molecular Approach to the cell. 2nd eds. 2000 chapter 1: An Overview of cells and Cell research.

جداسازی بوسیله کروماتوگرافی

اهمیت روش کروماتوگرتافی به دقت زیاد آن است که می تواند مقدار بسیار کم مواد موجود در عصاره سلولی را تفکیک کند. اساس این روش بر جابجایی ذرات موجود در یک بخش متحرک بر روی یک بخش جامد است. سرعت جابجایی مواد موجود در بخش متحرک با درشتی مولکول ها، جرم مولکولی آنها و میل ترکیبی مواد بستگی دارد  در نهایت نمونه بر حسب درشتی و جرم مولکولی در جایگاههای خاصی از بخش ثابت جایگزین می شود.

 کروماتوگرافی روی کاغذ

انواع جداسازی های مختلف و ساده بر روی کاغذ به عنوان پیشروان کروماتوگرافی کاغذی توصیف شده اند.

در این روش فاز ثابت یک محیط آبی است که مولکولهای آن با رشته های سلولی کاغذ کروماتوگرافی پیوندهای محکمی دارد و فاز متحرک یک حلال آلی است که با خاصیت موئینگی از خلال کاغذ عبور می کند. در این روش قطره ای از محلول حاوی مخلوطی که باید جدا شود را روی سک صفحه یا نوا کاغذ صافی در محل علامت گذاری شده قرار می دهند. در این محل، قطره به صورت یک لکه حلقوی پخش می‌شود. وقتی که لکه خشک شد، کاغذ را در یک ظرف مناسب سربسته طوری قرار می دهند که یک سر آن در حلال انتخاب شده به عنوان فاز متحرک فرو رود (لکه نباید توی محلول قرار گیرد چون لکه از کاغذ شسته می شود). حلال از طریق الیاف کاغذ در نتیجه کاغذ در نتیجه عمل موئینگی نفوذ می کند و اجزا مخلوط را به میزانهای مختلف در جهت جریان حمل می کند. نکته مهم این است که سطح کاغذ نباید کاملاً بوسیله حلال پوشانده شود، زیرا در این صورت اصلاً جداسازی صورت نمی گیرد و یا نواحی خیلی پخش می شوند. وقتی که حبهه حلال مسافت مناسبی را طی کرد یا بعد از یک زمان قابل قبول، کاغذ را از تانک بیرون آورده، جبهه حلال را با علامتی مشخص می کنند و مهلت می دهند تا کاغذ خشک شود.

اگر اجسام رنگی؛ باشند به صورت نواحی یا لکه هایی مجزا مشخص شوند. هدف این است که لکه ها فشرده و جدا از هم باشند. اگر لکه رنگی نبوده باید به روشهای شیمیایی یا فیزیکی آن را تشخیص داد.(استفاده از واکنشگر مکان یاب یا ماورابنفش) ساده ترین روش شناسایی بر اساس Rf یعنی نسبت فاصله طی شده بوسیله لکه تقسیم بر فاصله طی شده جبهه حلال است.

برای تفکیکی مطمئن تر، از کروماتوگرافی کاغذی دو بعدی استفاده می کنیم. در این حالت پس از اینکه مرحله اول کروماتوگرافی تمام شد. کاغذ صافی را با زاویه ۹۰ درجه می چرخانیم و مجدداً با حلال دیگری عمل گروماتوگرافی را پی می گیریم در نتیجه این عمل تفکیک مخلوط مورد نظر، بسیار دقیق تر صورت می گیرد.

موارد استعمال کروماتوگرافی کاغذی:

۱- جداسازی آمینواسیدها و پپتیدها در بررسی ساختارهای پروتئین ها

۲- آزمایش روزمره ادرار و سایر مایعات بدن برای اسید آمینه ها و قندها

۳- جداسازی بازهای پورین و نوکلئوتیدها در آزمایش اسید نوکلئیک

۴- جداسازی استروئیدها

۵- جداسازی ترکیبات علامت دار بوسیله رادیوایزوتوپ ها

مواردی که در جداسازی بوسیله کروماتوگرافی کاغذی موفق نبودند:

۱- جداسازی اجسام فرار غیر فعال مانند هیدروکربن ها

۲- اسیدهای چرب فرار

 کروماتوگرافی لایه نازک

در این روش که همان کروماتوگرافی اصلاح شده است، جاذب به صور لایه نازکی با ضخامت یکنواخت روی یک تکیه گاه صت بی اثر پخش می شود که معمولاً از صفحات شیشه ای استفاده می کنند. جاذب جامد به صورت پودر ریز را معمولاً با آب و گاهی با یک مایع آلی فرار به صورت خمیز در می آورند و آن را بوسیله دستگاههای پخش کننده تجاری یا یک پخش کننده خانگی یا حتی با دست روی صفجه پخش می کنند. (حتی با پاشیدن یا فرو بردن نیز امکان پذیر است) صفحه پوشیده از خمیر را خشک و با گرم کردن آن در حدود ۱۰۰ درجه به مدت از قبل تعیین شده، آن را فعال می کند.

جهت دریافت و خرید متن کامل مقاله و تحقیق و پایان نامه مربوطه بر روی گزینه خرید انتهای هر تحقیق و پروژه کلیک نمائید و پس از وارد نمودن مشخصات خود به درگاه بانک متصل شده که از طریق کلیه کارت های عضو شتاب قادر به پرداخت می باشید و بلافاصله بعد از پرداخت آنلاین به صورت خودکار  لینک دنلود مقاله و پایان نامه مربوطه فعال گردیده که قادر به دنلود فایل کامل آن می باشد .